Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展减慢的过程中逐渐扩展

从第一次注意到胰脏自身突变到注意到1HG癌症医学症状的成果百余人在学龄前末期就有极佳的刻画，多个胰脏自身突变相似性性的学龄前之中有70%在血清叠加后10年末之中风癌症，而随访15年的学龄前这一分之一增高到84%。相比较于之下，占医学1HG癌症一半以上的HG1HG癌症的得病机制还没得到充分的深入研究。

越来越多的人开始运用于分期系统会来定义1HG癌症的成果：性状在注意到多种胰脏自身突变时转到第1过渡阶段，注意到血糖异常时转到第2过渡阶段，注意到症状时转到第3过渡阶段。一些多发胰脏自身突变相似性性的性状，在1期和2期，成果较快，并发展为得病的1HG癌症。我们在此之前刻画了一四组在首次侦测到多种胰脏自身突变核查后至少10年无癌症的极快成果者，这四组病人总数少，但相似性不够加指明。随后，我们发现胰脏自身抗体依赖性CD8+T细胞会自由基在成果平稳的病人之中基本不发挥作用，但在全面性得病和长期发挥作用的癌症病人之中很容易侦测到。这意味著说明，与成果病人相比较于，这些病人诱发自由基的闭环强化。

早期深入研究说明，尽管闭环性T细胞会(Treg)生产量经常性，但癌症病人发挥作用一些系统会有缺陷，其之中之外对IL-2的自由基并能减小。此外，癌症病人之中的效可不CD4+T细胞会意味著对闭环不够具抵抗性，平庸为效可不T细胞会的抑制作用西移动，自然激发的Treg和体外激发的抑止Treg，以及抗体经历的CD4+T细胞会之中IL-2自由基西移动。本深入研究的旨在是刻画了CD4+闭环性T细胞会(Treg)在一小群极平稳成果者之中的相似性，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

分析方法：BOX深入研究是一项以人群基础上的纵向深入研究，在21岁表列出胃癌的病人亲属之中体检1HG癌症的危险性各种因素。我们在此之前刻画了长期平稳成果者的相似性，他们保持稳定多重胰脏自身突变相似性性将近10年，但没注意到癌症的医学症状，快性或非完成性诱发。随后，10名之后保持稳定无癌症并想要提供大量血清核查的平稳成果者纳入T和B细胞会系统会量化。在目前的深入研究之中，8名快成果者(SP四组)，之中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之中间的胰脏自身突变相似性性。所有的参加者都处于1HG癌症成果的1期，尽管一些人随后失去了胰脏自身突变对某些抗体的相似性性自由基，然而，一名病人仍然处于2期至少6年，但没注意到医学症状，一名病人被临床为癌症，该受试者72岁，在野外实验核查时，其HbA1c急剧下降到53 mmol/mol(7%)，在数据量化之中对该酪氨酸完成了除此以外评核。受控外周血单个核细胞会(PBMCs)，采用多给定流式细胞会练成和T细胞会抑制作用试验评核酪氨酸之中Treg的频百余人、表HG和系统会。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类确认、表征和回归)完成无行政官员聚类量化，评核Treg表HG。

结果：与肥胖酪氨酸相比较于，来自快成果体的思绪CD4+T细胞会的行政官员聚类说明了，激活的思绪CD4+ Treg频百余人增高，与糖皮质激素抑止的TNFR系统性肽(GITR)合理化增高有关。一名HbA1c急剧下降的病人与成果平稳者和给定的对照四组相比较于，Treg小曲大致相同。系统会量化说明，与肥胖酪氨酸相比较于，来自平稳成果体的Treg介导的CD4+效可不T细胞会抑制作用明显受损。平庸为对效可不CD4+T细胞会CD25和CD134合理化的抑制作用增高。

由此可知1 深入的表HG量化说明了，CD4+Treg亚HG在快成果数据流之中增高。由FlowSOM转化的Treg室，聚集在来自所有酪氨酸的活CD4+CD45RA -细胞会上。根据标有物合理化确认出10个元簇:思绪T细胞会_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T细胞会;HLA-DR + GITR +思绪T细胞会;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)运用于9个不同Treg标有转化的10个元簇的MST。每个节点代表一个一个大(100个一个大)，相当大的元一个大(10个元一个大)在节点四组周围手绘。每个节点之中的饼由此可知坚称单个标有的合理化级别。(b)每个元聚类的热由此可知，以说明了整体标有合理化。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)转化由此可知，以及FlowSOM识别的每个元簇的表层。(e-l)相比较重元素为每个metacluster盒两条路点阵由此可知(重元素> 0.05%)未确定为HD和SP四组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T细胞会(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T细胞会(l)。粉红色格次子代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对小写字母秩核查。此键适用于由此可知形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

由此可知2 运用于CITRUS的预测模HG猜测，Treg频百余人的增高是成果平稳的徽章。级别除此以外(a - f)和果树量化(g-k)比较SP参加者和给定的HD参加者在CD4+CD45RA−T细胞会上的差异。(a)基因型CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的指标性由此可知。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR合理化完成受控，精心设计FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(白斑)四组以及酪氨酸SP 606(粉红色)之中CD25+ cd127的频百余人汇总由此可知。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+除此以外次子集的盒两条路点阵由此可知;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)柑桔簇臂由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3合理化强度着色，标有突出的簇被识别为SP和HD数据流之中间的不同。(j)盒两条路点阵由此可知说明了了在SP(白斑)和HD(灰点)四组之中，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的相比较重元素(分之一)。(k)直方由此可知说明了每个簇的表HG(粉红色)和Treg标有相比较合理化与背景合理化(红色);上列，存储器Treg_3;下面一路上，存储器Treg_4。背景与所有其他簇之中标有的合理化有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对小写字母秩核查

由此可知3 与肥胖献血者相比较于，成果平稳者思绪treg的GITR增高。每个思绪CD4+T细胞会元簇(思绪T细胞会_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T细胞会;HLA-DR + GITR +思绪T细胞会;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)侦测每个合理化标有的改变。(a,b)来自HD (a)和S (b)数据流的合理化热由此可知(sp606不之外在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇之中所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(粉红色)的FlowSOM GITR合理化串联，说明了直方由此可知(c)和汇总由此可知(d)。Wilcoxon配对小写字母秩和核查，p< 0.07(粉红色)所有酪氨酸之外，p< 0.05(红色)酪氨酸SP 606和给定的HD不之外在测试之中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之中GITR合理化，从级别除此以外，从所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(粉红色)串联，说明了直方由此可知(e)和汇总由此可知(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对小写字母秩核查

由此可知4 来自平稳成果的CD4+ treg细胞会控制效可不CD4+T细胞会的并能减小。SP四组用红色的两条路线和格次子坚称，HD四组用粉红色的两条路线和格次子坚称，粉红色的两条路线/格次子坚称酪氨酸sp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会完成分选。CD4+CD25−(可不答者)被标有为CFSE, Treg按推论的分之一滴定。用抗CD3 /28微珠酪氨酸细胞会，人才3当晚完成流式细胞会练成侦测。(a-d)与CD4+可不答者相比较可不的treg人才(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD可不答者人才。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑制作用百份(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用百份。运用于相似性性对照(激活的响可不细胞会含treg)量化抑制作用百份。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

由此可知5 效可不CD4+T细胞会对平稳成果的T细胞会酪氨酸的抑制作用不够敏感。SP四组用红色的两条路线和格次子坚称，HD四组用粉红色的两条路线和格次子坚称，粉红色的两条路线/格次子坚称酪氨酸sp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会完成分选。CD4+CD25−(可不答者)被cfsel标有，treg按推论的分之一滴定。用抗CD3 /28微珠酪氨酸细胞会，人才3当晚完成流式细胞会练成(CD25反染)和细胞会因次子量化。HD Treg与HD、SP或sp606可不答者协同人才。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑制作用百分百余人(b)。(c,d) CD25抑制作用百分百余人(c)和CD134抑制作用百分百余人(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才之中的合理化。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论证：我们断定的论证是，来自平稳成果次子的酪氨酸思绪CD4+Treg在GITR合理化之中得到了扩展和比较丰富，合理化了必要性深入研究Treg在1HG癌症后果性状之中的值得注意的必要性。

书名出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28